液相色譜法測(cè)定中藥洗劑中苦參堿的含量

　　　1  儀器和試藥

　　液相色譜；TCQ-250超聲波清洗儀（北京醫(yī)療設(shè)備二廠）；電子天平AEG-220紫外分光光度儀UV-265甲醇為優(yōu)級(jí)純；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；苦參堿對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供（批號(hào)：110805-200306）。
　　2  方法與結(jié)果

　　2．1  色譜條件

　　Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相乙腈-甲醇-磷酸鹽溶液（25∶10∶65）；檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm；流速1 ml/min；柱溫25 ℃。

　　2．2  供試品溶液的制備

　　取本品50 ml，搖勻，精密量取5 ml，加濃氨試液調(diào)pH＝10后，用氯仿（30、30、30、20、20 ml）提取5次，合并提取液，揮干氯仿，加甲醇適量溶解殘?jiān)?，濾過(guò)，濾渣、容器用甲醇洗滌3次，每次5 ml，合并洗液與濾液，定量轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

　　2．3  對(duì)照品溶液的制備

　　取經(jīng)P2O5減壓干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加流動(dòng)相制成每毫升約含0.530 mg的對(duì)照品溶液。

　　2．4  陰性對(duì)照品溶液的制備

　　取缺苦參總生物堿的樣品適量，依供試品溶液的制備法，制備陰性對(duì)照品溶液。

　　2．5  系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

　　分別取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照無(wú)干擾。理論塔板數(shù)為8 128。

　　2．6  線性關(guān)系考察

　　精密稱(chēng)取苦參堿對(duì)照品適量，依對(duì)照品溶液制備法制備濃度0.106、0.318、0.530、0.742、0.954 g/L的溶液，分別精密吸取上述溶液5 μl，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對(duì)照品質(zhì)量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=38788X－53（r=0.999 8），表明苦參堿在0.53~4.77 μg呈線性關(guān)系。

　　2．7  精密度試驗(yàn)

　　精密吸取上述苦參堿對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定苦參堿峰面積，RSD為1.58%，表明精密度良好。

　　2．8  穩(wěn)定性試驗(yàn)

　　精密量取本品適量，依供試品溶液制備法制備供試品溶液，再精密吸取供試品溶液10 μl，依上述色譜條件在0、2、4、6、8 h分別進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，RSD為1.49%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

　　2．9  重復(fù)性試驗(yàn)

　　分別精密量取同一樣品5份，依供試品溶液制備法制備5份供試品溶液，精密吸取供試品溶液各10 μl，依上述色譜條件測(cè)定，RSD為0.95%，表明該方法的重復(fù)性良好。

　　2．10  加樣回收率試驗(yàn)

　　精密量取0.5 ml已知含量（35.767 g/L）的婦得康洗劑5份，分別添加苦參堿對(duì)照品適量，按上述供試品溶液制備法制備加樣回收供試品溶液，并進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，見(jiàn)表1。結(jié)果苦參堿的平均回收率為98.6%，RSD為1.17%。

　　2．11  樣品測(cè)定

　　精密量取樣品適量，依供試品溶液制備法制備供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液5 μl與供試品溶液10 μl注入液相色譜儀，依上述色譜條件測(cè)定，記錄苦參堿峰面積，重復(fù)測(cè)定2次，取平均值。結(jié)果見(jiàn)表2。表1  苦參堿的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果2  10批樣品中苦參堿的含量

　　3  討論

　　3．1  檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

　　精密稱(chēng)取干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解配成標(biāo)準(zhǔn)溶液，對(duì)苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果表明標(biāo)準(zhǔn)溶液在200 nm處有zui大吸收，考慮紫外吸收末端干擾大，且樣品中苦參堿含量高，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。

　　3．2  流動(dòng)相的選擇

　　選擇了3種流動(dòng)相：（1）乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液（1∶9），氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.0；（2）乙腈-0.005 mol/L庚烷基磺酸鈉溶液（25∶75）；（3）乙腈-甲醇-磷酸鹽溶液（25∶10∶65）。經(jīng)多次測(cè)試結(jié)果表明，流動(dòng)相（1） 峰分離不好，流動(dòng)相（2）的峰型不好，出現(xiàn)脫尾現(xiàn)象，流動(dòng)相（3）出峰時(shí)間合理，峰型好，分離度大于1.5。

　　3．3  萃取次數(shù)的考察

　　取洗劑5 ml，加濃氨試液調(diào)pH＝10后，分別用氯仿（30、30、30、20、20、20 ml）提取3、4、5、6次，合并提取液，揮干氯仿，加甲醇適量溶解殘?jiān)?，濾過(guò)，濾渣，容器用甲醇洗滌3次，每次5 ml，合并洗液與濾液，定量轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，通過(guò)比較峰面積，5次萃取基本可將苦參堿萃取*。